Fixare (metoda de pregătire)
În biologie și medicină , în special în patologie , fixarea se referă la conservarea structurilor obiectelor histologice sau anatomice în scopul investigațiilor ulterioare. Fixativele utilizate depind de utilizarea în continuare a preparatului produs în acest mod.
Metode
metodă | Exemplu de domeniu | Detalii despre procedură |
---|---|---|
Formaldehidă , paraformaldehidă | Istologia convențională și imunohistologia, precum și anatomia | Înmuiere în soluție tamponată de formaldehidă 40 g / L. Formaldehida acționează ca un denaturant , de ex. B. cu soluție de formalină sau Bouin . |
Crioconservare | Tăiere rapidă | Îngheață la aproximativ -30 ° C, de exemplu cu gheață uscată |
Alcooli (de exemplu, metanol sau etanol ), acetonă sau dietil eter | Citodiagnostic | Deplasarea apei intracelulare și denaturarea simultană prin înmuiere. De obicei se folosește o soluție apoasă de dislocator, concentrația soluției este crescută treptat și la final se folosește fixativ 100%. |
Agenți de reticulare, cum ar fi glutaraldehida | Microscopie electronică de transmisie , bronzare | Tetroxidul de osmiu , acetat de uranil sau acid tungstofosforic sunt utilizate în principal ca mijloace de contrast . |
căldură | microbiologie | Încălzirea preparatului într-o flacără (de exemplu, cea a unui arzător Bunsen ) sau utilizarea microundelor |
soluții de fixare care păstrează culoarea | Pregătirea macroscopică | De exemplu, soluția Jores I, soluția Kaiserling I, soluția Romhànyische și alte soluții. |
Sărurile de metale grele | Histologie, bronzare | Formarea sărurilor de proteine slab solubile, de ex. B. în bronzarea cromului sau în fixarea cu săruri de cupru conform Hollande sau cu săruri de mercur conform Zenker |
În timpul fixării în microscopie , materialul care trebuie examinat este fixat pe sticla lamelei . În acest scop, poate fi utilizată încălzirea, prin care substanțele organice ale obiectului, cum ar fi proteinele și carbohidrații polimerici ( nămol ), sunt schimbate în așa fel încât să lipească obiectul de suprafața sticlei ( fixare termică ). Acțiunea anumitor substanțe chimice, cum ar fi formaldehida , poate schimba componentele polimerice ale obiectului (de exemplu, denaturarea ) în așa fel încât acestea aderă obiectul la suprafața sticlei. Când microorganismele sunt pătate pe o lamă de sticlă, ele sunt de obicei ucise în mare măsură de fixare. Numai după fixare, dacă este necesar, sunt colorate pentru a evidenția structurile obiectelor, deoarece obiectele nu mai pot fi clătite atât de ușor și deoarece structurile lor nu mai sunt atât de ușor schimbate prin procesul de colorare. Fixarea este întotdeauna însoțită de denaturare, care reduce autoliza . Înainte de microsecție , un țesut biologic este încorporat după fixarea cu parafină . acest lucru creează o țesătură FFPE .
Când animalele întregi sau părțile lor sunt fixate prin perfuzie sau injecție în vasele de sânge , se folosește și perfuzie , de ex. B. în fixația Thiel . Pentru fixare conform lui Walter Thiel , se utilizează o soluție de fixare cu acid boric , etilen glicol , azotat de amoniu și potasiu, clorocrezol , sulfit de sodiu și formaldehidă. Depozitarea ulterioară are loc într-o soluție mai diluată (soluție butoi ).
În imunologie , procesul de anulare a efectelor unei fixări se numește demascarea antigenului . Legătura încrucișată și modificarea biomoleculelor cu formaldehida poate fi inversată prin încălzire sau prin adăugarea de baze .
Fixarea în anatomie
În anatomie, atât corpul întreg, cât și corpurile individuale pot fi fixate. În special în anatomia macroscopică, acest lucru este posibil la donatorii de corp . Astfel de preparate sunt apoi utilizate în cursurile de pregătire pentru predarea medicală. Prima descriere a proprietăților de fixare ale metanului în raport cu anatomia macroscopică (medicina umană) a avut loc în 1894 de F. Blum. El a observat o tranziție a țesutului de la o „stare agregată fermă, moale la o modificare mult mai rezistentă și mai dură”. El a observat-o mai întâi prin contactul cu propria piele și ulterior întărirea epidermei . Apoi a pus un „șoricel antrax” în formaldehidă pentru o noapte și apoi a constatat că se simte ca un preparat alcoolic . Blum a mai descris că o diluție de 10 ori (valoare inițială: 40% soluție) s-a întărit mai repede decât etanolul, chiar și cu țesut mai mare. Macroscopic, țesutul a fost mai bine conservat decât după tratamentul cu etanol, în timp ce nu s-a putut observa o contracție semnificativă. În creier , materia albă și cenușie ar putea fi chiar diferențiate în mod clar. După deshidratare și încorporare în microscopie celloïdin, susceptibilitatea la colorare histologică a fost încă detectabilă chiar și zile mai târziu. Blum a cooperat cu Weigert, care a efectuat acțiunile asupra creierului și măduvei spinării , în timp ce Blum însuși a efectuat prelucrarea celorlalte organe. Meister, Lucius și Brüning zu Höchst a. M. (astăzi Sanofi SA ) a atras atenția asupra produsului „Formol” (denumirea produsului) și l-a dat Blum pentru revizuire. Tatăl medicului practicant F. Blum, profesorul superior J. Blum, a folosit formaldehida pentru prima dată în 1893 pentru a păstra preparatele zoologice și botanice. Astăzi, formaldehida este cel mai utilizat fixant și conservant. Metodele de astăzi se bazează adesea pe metoda formalinei, dar sunt disponibile și alte metode de reținere a unui cadavru. În special, fixările mobile și adesea care păstrează culoarea se mută din ce în ce mai mult în centrul educației și formării medicale datorită valorii lor extrem de realiste. Cele mai cunoscute soluții includ așa-numitele soluții de alcool și sare , precum și soluția Thiel .
literatură
- Maria Mulisch, Ulrich Welsch (ed.): Tehnica microscopică Romeis. Ediția a 18-a. Editura Spectrum Academic, Heidelberg 2010, ISBN 978-3-8274-1676-6 . ( previzualizare limitată în căutarea Google Book)
- Gudrun Lang: Histotehnologie. Springer-Verlag, 2013, ISBN 978-3-7091-1190-1 . Capitolul 5: Fixare.
- Siegfried Schwerin: Preparate anatomice uscate, umede și osoase. Springer-Verlag, 1952, ISBN 978-3-662-30466-2 .
- Walter F. Steinmann: Metode de preparare macroscopică în medicină. Thieme-Verlag, 1982, ISBN 3-13-623901-6 .
Dovezi individuale
- ^ A b Mareike Dartsch: Aparatul de suspensie vesicouretral ventral ca parte a sistemului de continență masculină. Disertație . Facultatea de Medicină a Universității din Leipzig, 2012, p. 35.
- ^ H. Fraenkel-Conrat, BA Brandon, HS Olcott: Reacția formaldehidei cu proteinele; participarea grupurilor de indoli; gramicidină. În: Jurnalul de chimie biologică. Volumul 168, numărul 1, aprilie 1947, ISSN 0021-9258 , pp. 99-118. PMID 20291066 .
- ↑ H. Fraenkel-Conrat, HS Olcott: reacția formaldehidei cu proteinele; reticulare între grupările amino și amida primară sau grupările guanidil. În: Journal of the American Chemical Society. Volumul 70, numărul 8, august 1948, ISSN 0002-7863 , pp. 2673-2684. PMID 18876976 .
- ↑ H. Fraenkel-Conrat, HS Olcott: Reacția formaldehidei cu proteinele; legarea încrucișată a grupărilor amino cu grupări fenol, imidazol sau indol. În: Jurnalul de chimie biologică. Volumul 174, numărul 3, iulie 1948, ISSN 0021-9258 , pp. 827-843. PMID 18871242 .
- ↑ F. Blum: Notă privind utilizarea formaldehidei (formol) ca întărire și conservant. În: Anat. 9, 1894, pp. 229-231.
- ↑ F. Blum: Formaldehida ca agent de întărire. În: Zschr.f. Mikro. și microscop. Tehnologie. 10, 1896, pp. 314-315.
- ↑ J. Blum: Formol ca lichid de conservare. În: Zool. Număr 10, 1893, pp. 450-452.
- ↑ Reinhard Hildebrand: Formalin. În: Werner E. Gerabek , Bernhard D. Haage, Gundolf Keil , Wolfgang Wegner (eds.): Enzyklopädie Medizingeschichte. Volumul 1: AG. Walter de Gruyter, Berlin / New York 2007, ISBN 978-3-11-019703-7 , p. 410.
- ↑ S. Hayashi și colab.: Metodă de soluție de sare saturată: o îmbălsămare utilă a cadavrelor pentru formarea abilităților chirurgicale. În: Medicine Baltimore. Vol. 93, nr. 27, 2014, pp. 196-197. ISSN 0025-7974
- ^ R. Coleman, I. Kogan: Un fluid îmbunătățit de îmbălsămare cu formaldehidă scăzută pentru a păstra cadavrele pentru predarea anatomiei. În: J. Anat.192 , 1998, pp. 443-446.
- ↑ J. Weigner: Soluție de nitrit cu etanol-polietilen glicol 400 soluție pentru fixarea și conservarea organelor și corpurilor animalelor pentru predare și cercetare. În: Taxidermistul. Vol. 57, 2011, pp. 34-53, ISSN 0032-6542
- ↑ W. Thiel: Conservarea cadavrelor întregi în culori naturale. În: Ann. Anat.174 , 1992, pp. 185-195.